sábado, 17 de marzo de 2012

GAMMAPATIAS


MIELOMA MULTIPLE
Frecuencia:
Forma de cáncer (1% de todos los cánceres) 15 000 personas mueren cada año
60 000 casos en Europa, 250 en todo el mundo 000
Afecta a las células plasmáticas de médula ósea (linfocitos B)
Los síntomas
      Sangrados
dolor de espalda y huesos
Aumento de la sensibilidad a infecciones
Los síntomas  tipicos de la anemia (cansancio, problemas respiratorios)
Fracturas frecuentes e inexplicables.
Gammapatías se caracterizan por la presencia de una inmunoglobulina monoclonal en la electroforesis de proteínas séricas

Gammapatías sintomáticas:

-El mieloma múltiple (MM)
-Enfermedad Waldenström
- Linfoma No Hodgkins
-Leucemia linfoide crónica
-Enfermedad de cadena pesada
-Amiloidosis

Frecuencia de gammapatias




MGUS  Gammapatías monoclonales de significado incierto (GMSI)
Está presente en el 3% de la población general durante 50 años de edad. La prevalencia aumenta con la edad: 1,7% en el de 50 a 59 años de edad y más del 5% después de 70 años de edad
      Gammapatía aislada, sin signos clínicos, descubierto por casualidad y se caracteriza por:
* Presencia de Ig monoclonal <30 g / L
* Células de la médula ósea plasma <10%
* Bence Jones proteínas negativa o <1 g / L
* Calcemia normal, Hb y creatininemia
* Nivel normal de Igs otros
* No hay lesiones óseas

MIELOMA INDOLENTE
      Un tipo de crecimiento muy lento del mieloma se caracteriza por:
- La presencia de inmunoglobulinas monoclonales, debido a las células plasmáticas anormales ≥ 30 g / l

- La ausencia de lesiones óseas habituales mieloma o síntomas relacionados

los lineamientos establecen correr inmunotyping o inmunofijacion para el diagnostico de estas enfermedades



INVESTIGACION DE COMPONENTE MONOCLONAL

INVESTIGACION DE COMPONENTE MONOCLONAL EN EL LABORATORIO CLINICO

SINTESIS DE INMUNOGLOBULINAS
      Codificadas por los genes
       Producido por plasmocitos, el paso final de la diferenciación de los linfocitos B.
      Un organismo adulto puede tener 1020 moléculas de diferentes Ig, dando lugar a una policlonalidad muy alto.
      Las células procedentes de cada linfocito B generan un clon de linfocitos por divisiones sucesivas.
      Una respuesta inmune normal es mediado por una respuesta policlonal por parte de los linfocitos.






POSICIÓN DE UNA INMUNOGLOBULINA MONOCLONAL EN LA ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS SÉRICAS

      Proteínas monoclonales generalmente migran como homogéneo y banda estrecha (picos).
      Principalmente en la zona gamma.
      Con menos frecuencia en otras zonas (beta o alfa-2)
      La estimulación selectiva de algunos clones
Oligoclonalidad

* La producción excesiva de un clon
monoclonalidad

Los Ig monoclonal es un producto homogéneo a partir de un solo clon de células B malignas que es hiper-estimulado.

ORIGEN DE PERFILES ANORMALES IG
      Múltiples factores:
* Translocaciones cromosómicas
* Pérdida de la regulación de la expresión génica
* Inmunosupresión adquirida (tratamientos inmunosupresores)
* Las infecciones virales (EBV, HTLV I, VIH ...)
* Infecciones crónicas (VHC, Leshmaniasis)
* La estimulación del sistema inmune
* Enfermedades Autoinmunes
En estas situaciones, una proliferación aberrante de un clon
(monoclonal Ig) o muchos clones (Igs oligoclonales o policlonales)
puede ocurrir. Estas proliferaciones pueden ser transitorios.
PRINCIPIO DE INMUNOTYPING
      Dilución del suero en la copa con un disolvente específico
El suero diluido se mezcla con los antisueros 5 (IgG, IgA, IgM, kappa y lambda). La reacción entre el AS y Ag es muy rápida en medio líquido, sin ningún tipo de incubación o etapa de sedimentación.
Un pocito sin AS se utiliza para obtener el patrón de referencia (ELP)
INTERPRETACION
      Se forma un complejo inmunológico que se desplaza en la posición anódica: más anódico que la albúmina, o entre la albúmina y la fracción alfa-1

El pico monoclonal se identifica cuando el pico desaparece con un determinado anticuerpo contra una cadena pesada (G, A o M) y con un anticuerpo contra la cadena ligera kappa o lambda
                     

                              
IgG Lambda





viernes, 16 de marzo de 2012

ELECTROFORESIS DE PROTEINAS


ELECTROFORESIS DE PROTEINAS

La electroforesis es una técnica que permite la separación de moléculas en un soporte sometido a un campo eléctrico. Sus aplicaciones son numerosas, siendo importante su papel en el análisis de las proteínas presentes en el suero y otros líquidos biológicos. Por ello es muy útil para el diagnóstico y seguimiento de patologías relacionadas con el cáncer, la búsqueda de anomalías del sistema inmunitario o en el estudio de hemoglobinas


PROTEINAS
Las proteínas son macromoléculas compuestas de aminoácidos.

Las proteínas pueden estar cargada positiva o negativamente (de acuerdo a su composición de aminoácidos y el pH del medio ambiente).

Las proteínas son los principales componentes de nuestro cuerpo y juegan varios roles (transporte estructurales, de regulación, defensa ...)

En el diagnóstico clínico, análisis de proteínas en diversos líquidos biológicos se pueden realizar: la sangre (glóbulos rojos o en suero), orina, líquido cefalorraquídeo (LCR).



PRINCIPIO DE ELECTROFORESIS DE PROTEINAS


La electroforesis es la separación de moléculas cargadas en un campo eléctrico.

Las Moléculas migran hacia el ánodo (+) o el cátodo (-) de acuerdo a su carga.

 Las proteínas pueden ser separados utilizando un medio tamponado sólido (electroforesis de agarosa) o en fase líquida (electroforesis capilar).



PRINCIPALES FRACCIONES DE PROTEINAS



 CUAL ES EL PROPOSITO DE REALIZAR UNA ELECTROFORESIS DE PROTEINAS
  • Para detectar anomalías en las proteínas del suero:


    Cuantitativas: aumento o disminución de algunas fracciones
    Cualitativas: la presencia de la fracción o fracciones anormales

  • Confirmar el diagnóstico patológico en asociación con otros parámetros: la inflamación, la hepatitis, la cirrosis o el perfil de nefrótico.

  • Identificar la presencia de una inmunoglobulina monoclonal, cuando se sospecha de un mieloma con signos clínicos

  • Permiten una detección precoz del mieloma asintomático.

     
  • Para monitorear la evolución de la enfermedad maligna o seguir la eficacia del tratamiento inmunosupresor.

     
FRACCIONES








SUERO NORMAL





PRINCIPALES PATOLOGIAS





Condiciones o enfermedades relacionadas con los cambios de patrón de electroforesis de proteínas séricas

Disminucion Incremento Pico adicional
Albumin - Nephrotic syndrome    
- Gastroenteropathies
- Lymphoproliferative syndrom
- Malnutrition, denutrition
- Hepatocellular insufficiency
- Inflammation    
- Dehydration
- Hemoconcentration
- Bisalbumi-nemia(Conge-nital, drug,
pancreatitis)
Alpha 1 - Protein losses
- Hepatocellular insufficiency
- Congenital deficiency of A1AT
- Inflammation -A1AT phenotype
Alpha 2 - Hepatocellular insufficiency
- Intravascular hemolysis



  • Inflammation
  • Nephrotic syndrome
    - Free light chain disease



  • Myeloma
  • Lymphoma
  • Leukemia
  • MGUS



  • DISMINUCIONINCREMENTOPICO ADICIONAL
    Beta- Hepatocellular insufficiency
    - C3 chronic deficiency, C3 hyperconsumption
    - Aging sample (C3 degradation)
    - Biliary obstruction
    - Nephrotic syndrome (only on gel)
    - Cirrhosis



  • Iron deficiency anemia
  • Strong hemolysis
    - Myeloma, lymphoma…



  • Myeloma
  • Lymphoma
  • Leukemia
  • MGUS
  • Gamma - Immunodeficiency
    - Immunosuppressive treatment
    - Free light chain disease
    - Inflammation



  • Cirrhosis
  • Myeloma
  • Lymphoma
  • Leukemia



  • Myeloma
  • Lymphoma
  • Leukemia
  • MGUS



  • INFLAMACION
    • Inflamación aguda asociada con:
      -aumento de a1 y a2 globulinas
      debido a un aumento de: orosomucoide, alfa-1 antitripsina y haptoglobina.

      Inflamación crónica asociada con:
      - Aumento de la alfa-1, alfa-2 globulinas y un aumento policlonal de las gammaglobulinas
      - Disminución de la albúmina, globulinas beta (debido a una disminución de la transferrina.)


    INFLAMACION AGUDA


    INFLAMACION CRONICA


    SINDROME NEFROTICO
    Esta enfermedad está asociada con:
    - Una disminución de la albúmina, alfa-1 globulinas
    - Un aumento de la alfa-2 globulinas (debido a un aumento de la macroglobulina alfa-2).
    - El gel: aumento de las globulinas beta (debido a un aumento de las lipoproteínas beta en la nefrosis lipoidea);
    - En los sistemas capilares: las lipoproteínas de migrar dentro de la fracción albúmina ningún aumento de las globulinas beta, pero la deformación de la fracción de albúmina puede ocurrir







    CIRROSIS
    • Esta enfermedad está asociada con:
      - Una disminución de la albúmina, alfa-1 y globulinas alfa-2 (debido a la insuficiencia hepatocelular)
      - Un aumento policlonal de las gammaglobulinas beta-(beta-gamma puente debido al aumento policlonal de Ig A en beta)
    PUENTE BETA-GAMMA


    HIPOGAMMAGLOBULINEMIA
    • Disminución de las inmunoglobulinas policlonales en la zona gamma

      Se asocia con:
      - Parcial o total de la inmunodeficiencia
      - El tratamiento inmunosupresor
      - Enfermedad de las cadenas ligeras libres o mieloma no secretor





    HIPERGAMMAGLOBULINEMIA
    • Aumento de las inmunoglobulinas policlonales en la zona gamma

      Se asocia con:
      - Inflamación
      - Cirrosis
      - Infecciones subaguda y crónica




    Posición de una inmunoglobulina monoclonal en la electroforesis de proteínas séricas
    • Proteínas monoclonales generalmente migran como homogéneo y banda estrecha (picos)

      Principalmente en la zona gamma

      Con menos frecuencia en otras zonas (beta o alfa-2)







     

    jueves, 15 de marzo de 2012

    BROCHURES SEBIA


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    El propósito de Sebia es aportar soluciones para el trabajo diario del laboratorio en electroforesis a través del desarrollo tecnológico proveyendo los productos de más alta calidad en el mercado ya que somos la única Empresa que se dedica exclusivamente a la electroforesis

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    Protocolo para realizar ID/AST en Vitek 2 Compact desde frascos de hemocultivo positivos




    Protocolo para realizar ID/AST en Vitek 2 Compact desde frascos de hemocultivo positivos para las principales Enterobacterias y Pseudomonas aeruginosa



    Protocolo:


    1-   Partiendo  de  una  botella  de  hemocultivo  positiva,  hacer  coloración  de Gram.
    2-   Seguir únicamente con aquellas botellas positivas en dónde la coloración de Gram haya evidenciado bacilos gram negativos y la flora sea en apariencia monomicrobiana.
    3-   Bajo estas condiciones, tomar 4 ml de sangre utilizando una jeringa de 5 ml y colocarla en un tubo estéril con separador de gel (los tubos que se utilizan para química clínica).
    4-   Centrifugar a 1,525xg durante 10 minutos.
    5-   Aspirar el sobrenadante con una pipeta estéril.
    6-   Ayudándose de un hisopo de algodón estéril, retirar al film bacteriano que habrá quedado en la parte superior del gel.
    7-   Utilizar el hisopo para preparar una suspensión bacteriana entre 0.5-0.63
    McFarland en 3 ml de la solución salina provista por bioMérieux (NaCl 0.45-0.5%).
    8-   Procesar la suspensión siguiendo el procedimiento estándar del Manual del
    Usuario de Vitek 2 Compact.


    REFERENCIA