GAMMAPATIAS

MIELOMA MULTIPLE

Frecuencia:
Forma de cáncer (1% de todos los cánceres) 15 000 personas mueren cada año
60 000 casos en Europa, 250 en todo el mundo 000
Afecta a las células plasmáticas de médula ósea (linfocitos B)

Los síntomas

•      Sangrados
dolor de espalda y huesos
Aumento de la sensibilidad a infecciones
Los síntomas  tipicos de la anemia (cansancio, problemas respiratorios)
Fracturas frecuentes e inexplicables.

Gammapatías se caracterizan por la presencia de una inmunoglobulina monoclonal en la electroforesis de proteínas séricas

Gammapatías sintomáticas:

-El mieloma múltiple (MM)
-Enfermedad Waldenström

- Linfoma No Hodgkins
-Leucemia linfoide crónica
-Enfermedad de cadena pesada
-Amiloidosis

Frecuencia de gammapatias

MGUS  Gammapatías monoclonales de significado incierto (GMSI)

Está presente en el 3% de la población general durante 50 años de edad. La prevalencia aumenta con la edad: 1,7% en el de 50 a 59 años de edad y más del 5% después de 70 años de edad

•      Gammapatía aislada, sin signos clínicos, descubierto por casualidad y se caracteriza por:
* Presencia de Ig monoclonal <30 g / L
* Células de la médula ósea plasma <10%
* Bence Jones proteínas negativa o <1 g / L
* Calcemia normal, Hb y creatininemia
* Nivel normal de Igs otros
* No hay lesiones óseas

MIELOMA INDOLENTE

•      Un tipo de crecimiento muy lento del mieloma se caracteriza por:
- La presencia de inmunoglobulinas monoclonales, debido a las células plasmáticas anormales ≥ 30 g / l

- La ausencia de lesiones óseas habituales mieloma o síntomas relacionados

los lineamientos establecen correr inmunotyping o inmunofijacion para el diagnostico de estas enfermedades

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INVESTIGACION DE COMPONENTE MONOCLONAL

INVESTIGACION DE COMPONENTE MONOCLONAL EN EL LABORATORIO CLINICO

SINTESIS DE INMUNOGLOBULINAS

•      Codificadas por los genes

•       Producido por plasmocitos, el paso final de la diferenciación de los linfocitos B.

•      Un organismo adulto puede tener 10²⁰ moléculas de diferentes Ig, dando lugar a una policlonalidad muy alto.

•      Las células procedentes de cada linfocito B generan un clon de linfocitos por divisiones sucesivas.

•      Una respuesta inmune normal es mediado por una respuesta policlonal por parte de los linfocitos.

POSICIÓN DE UNA INMUNOGLOBULINA MONOCLONAL EN LA ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS SÉRICAS

•      Proteínas monoclonales generalmente migran como homogéneo y banda estrecha (picos).

•      Principalmente en la zona gamma.

•      Con menos frecuencia en otras zonas (beta o alfa-2)

•      La estimulación selectiva de algunos clones
Oligoclonalidad

* La producción excesiva de un clon
monoclonalidad

Los Ig monoclonal es un producto homogéneo a partir de un solo clon de células B malignas que es hiper-estimulado.

ORIGEN DE PERFILES ANORMALES IG

•      Múltiples factores:

* Translocaciones cromosómicas
* Pérdida de la regulación de la expresión génica
* Inmunosupresión adquirida (tratamientos inmunosupresores)
* Las infecciones virales (EBV, HTLV I, VIH ...)
* Infecciones crónicas (VHC, Leshmaniasis)
* La estimulación del sistema inmune
* Enfermedades Autoinmunes

En estas situaciones, una proliferación aberrante de un clon
(monoclonal Ig) o muchos clones (Igs oligoclonales o policlonales)
puede ocurrir. Estas proliferaciones pueden ser transitorios.

PRINCIPIO DE INMUNOTYPING

•      Dilución del suero en la copa con un disolvente específico
El suero diluido se mezcla con los antisueros 5 (IgG, IgA, IgM, kappa y lambda). La reacción entre el AS y Ag es muy rápida en medio líquido, sin ningún tipo de incubación o etapa de sedimentación.
Un pocito sin AS se utiliza para obtener el patrón de referencia (ELP)

INTERPRETACION

•      Se forma un complejo inmunológico que se desplaza en la posición anódica: más anódico que la albúmina, o entre la albúmina y la fracción alfa-1

El pico monoclonal se identifica cuando el pico desaparece con un determinado anticuerpo contra una cadena pesada (G, A o M) y con un anticuerpo contra la cadena ligera kappa o lambda

                     

                              

IgG Lambda

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ELECTROFORESIS DE PROTEINAS

ELECTROFORESIS DE PROTEINAS

La electroforesis es una técnica que permite la separación de moléculas en un soporte sometido a un campo eléctrico. Sus aplicaciones son numerosas, siendo importante su papel en el análisis de las proteínas presentes en el suero y otros líquidos biológicos. Por ello es muy útil para el diagnóstico y seguimiento de patologías relacionadas con el cáncer, la búsqueda de anomalías del sistema inmunitario o en el estudio de hemoglobinas


PROTEINAS
Las proteínas son macromoléculas compuestas de aminoácidos.

Las proteínas pueden estar cargada positiva o negativamente (de acuerdo a su composición de aminoácidos y el pH del medio ambiente).

Las proteínas son los principales componentes de nuestro cuerpo y juegan varios roles (transporte estructurales, de regulación, defensa ...)

En el diagnóstico clínico, análisis de proteínas en diversos líquidos biológicos se pueden realizar: la sangre (glóbulos rojos o en suero), orina, líquido cefalorraquídeo (LCR).


PRINCIPIO DE ELECTROFORESIS DE PROTEINAS


La electroforesis es la separación de moléculas cargadas en un campo eléctrico.

Las Moléculas migran hacia el ánodo (+) o el cátodo (-) de acuerdo a su carga.

 Las proteínas pueden ser separados utilizando un medio tamponado sólido (electroforesis de agarosa) o en fase líquida (electroforesis capilar).

PRINCIPALES FRACCIONES DE PROTEINAS

 CUAL ES EL PROPOSITO DE REALIZAR UNA ELECTROFORESIS DE PROTEINAS

• Para detectar anomalías en las proteínas del suero:
  
  
  Cuantitativas: aumento o disminución de algunas fracciones
  Cualitativas: la presencia de la fracción o fracciones anormales

• Confirmar el diagnóstico patológico en asociación con otros parámetros: la inflamación, la hepatitis, la cirrosis o el perfil de nefrótico.
  
  
• Identificar la presencia de una inmunoglobulina monoclonal, cuando se sospecha de un mieloma con signos clínicos
  
  
• Permiten una detección precoz del mieloma asintomático.
  
   
• Para monitorear la evolución de la enfermedad maligna o seguir la eficacia del tratamiento inmunosupresor.
  
   

FRACCIONES

SUERO NORMAL

PRINCIPALES PATOLOGIAS

Condiciones o enfermedades relacionadas con los cambios de patrón de electroforesis de proteínas séricas

	Disminucion	Incremento	Pico adicional
Albumin	- Nephrotic syndrome     - Gastroenteropathies - Lymphoproliferative syndrom - Malnutrition, denutrition - Hepatocellular insufficiency - Inflammation	- Dehydration - Hemoconcentration	- Bisalbumi-nemia(Conge-nital, drug, pancreatitis)
Alpha 1	- Protein losses - Hepatocellular insufficiency - Congenital deficiency of A1AT	- Inflammation	-A1AT phenotype
Alpha 2	- Hepatocellular insufficiency - Intravascular hemolysis	Inflammation Nephrotic syndrome - Free light chain disease	Myeloma Lymphoma Leukemia MGUS

	DISMINUCION	INCREMENTO	PICO ADICIONAL
Beta	- Hepatocellular insufficiency - C3 chronic deficiency, C3 hyperconsumption - Aging sample (C3 degradation)	- Biliary obstruction - Nephrotic syndrome (only on gel) - Cirrhosis Iron deficiency anemia Strong hemolysis - Myeloma, lymphoma…	Myeloma Lymphoma Leukemia MGUS
Gamma	- Immunodeficiency - Immunosuppressive treatment - Free light chain disease	- Inflammation Cirrhosis Myeloma Lymphoma Leukemia	Myeloma Lymphoma Leukemia MGUS

INFLAMACION

• Inflamación aguda asociada con:
  -aumento de a1 y a2 globulinas
  debido a un aumento de: orosomucoide, alfa-1 antitripsina y haptoglobina.
  
  Inflamación crónica asociada con:
  - Aumento de la alfa-1, alfa-2 globulinas y un aumento policlonal de las gammaglobulinas
  - Disminución de la albúmina, globulinas beta (debido a una disminución de la transferrina.)

INFLAMACION AGUDA

INFLAMACION CRONICA

SINDROME NEFROTICO
Esta enfermedad está asociada con:
- Una disminución de la albúmina, alfa-1 globulinas
- Un aumento de la alfa-2 globulinas (debido a un aumento de la macroglobulina alfa-2).
- El gel: aumento de las globulinas beta (debido a un aumento de las lipoproteínas beta en la nefrosis lipoidea);
- En los sistemas capilares: las lipoproteínas de migrar dentro de la fracción albúmina ningún aumento de las globulinas beta, pero la deformación de la fracción de albúmina puede ocurrir

CIRROSIS

• Esta enfermedad está asociada con:
  - Una disminución de la albúmina, alfa-1 y globulinas alfa-2 (debido a la insuficiencia hepatocelular)
  - Un aumento policlonal de las gammaglobulinas beta-(beta-gamma puente debido al aumento policlonal de Ig A en beta)

PUENTE BETA-GAMMA


HIPOGAMMAGLOBULINEMIA

• Disminución de las inmunoglobulinas policlonales en la zona gamma
  
  Se asocia con:
  - Parcial o total de la inmunodeficiencia
  - El tratamiento inmunosupresor
  - Enfermedad de las cadenas ligeras libres o mieloma no secretor

HIPERGAMMAGLOBULINEMIA

• Aumento de las inmunoglobulinas policlonales en la zona gamma
  
  Se asocia con:
  - Inflamación
  - Cirrosis
  - Infecciones subaguda y crónica

Posición de una inmunoglobulina monoclonal en la electroforesis de proteínas séricas

• Proteínas monoclonales generalmente migran como homogéneo y banda estrecha (picos)
  
  Principalmente en la zona gamma
  
  Con menos frecuencia en otras zonas (beta o alfa-2)

 

BROCHURES SEBIA

http://es.scribd.com/doc/85528885/Serum-Electrophoresis

http://es.scribd.com/doc/85529089/0709-coverstory

http://es.scribd.com/doc/85529253/newsletter10-1-sebia

http://es.scribd.com/doc/85529243/newsletter04-3

MENU DE PRUEBAS HYDRASYS 2

http://es.scribd.com/doc/85527408/Menu-de-Pruebas-Hydrasis-2-Sebia

SEBIA ELECTROFORESIS

Sebia

El propósito de Sebia es aportar soluciones para el trabajo diario del laboratorio en electroforesis a través del desarrollo tecnológico proveyendo los productos de más alta calidad en el mercado ya que somos la única Empresa que se dedica exclusivamente a la electroforesis

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Sebia está comprometida con la excelencia en electroforesis clínica por:

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Sebia Electroforesis está 100% dedicado a la ciencia de la electroforesis, dedicando gran parte de su presupuesto anual al desarrollo de nuevas técnicas y productos, siguiendo nuestra política de crecimiento estando siempre a la vanguardia.
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Protocolo para realizar ID/AST en Vitek 2 Compact desde frascos de hemocultivo positivos

Protocolo para realizar ID/AST en Vitek 2 Compact desde frascos de hemocultivo positivos para las principales Enterobacterias y Pseudomonas aeruginosa

Protocolo:

1-   Partiendo  de  una  botella  de  hemocultivo  positiva,  hacer  coloración  de Gram.

2-   Seguir únicamente con aquellas botellas positivas en dónde la coloración de Gram haya evidenciado bacilos gram negativos y la flora sea en apariencia monomicrobiana.

3-   Bajo estas condiciones, tomar 4 ml de sangre utilizando una jeringa de 5 ml y colocarla en un tubo estéril con separador de gel (los tubos que se utilizan para química clínica).

4-   Centrifugar a 1,525xg durante 10 minutos.

5-   Aspirar el sobrenadante con una pipeta estéril.

6-   Ayudándose de un hisopo de algodón estéril, retirar al film bacteriano que habrá quedado en la parte superior del gel.

7-   Utilizar el hisopo para preparar una suspensión bacteriana entre 0.5-0.63

McFarland en 3 ml de la solución salina provista por bioMérieux (NaCl 0.45-0.5%).

8-   Procesar la suspensión siguiendo el procedimiento estándar del Manual del

Usuario de Vitek 2 Compact.

REFERENCIA

http://es.scribd.com/doc/85525087/Bruins-IDAST-Directo-Del-Frasco-de-HC-p-BGN-2004